绿茶是我国常用的饮料，绿茶的防癌抗癌、保健治疗作用屡见报道，但绿茶的防紫外线作用报道较少。老鹰茶是我国南方民间长期饮用的植物代用茶。我们采用体外培养的人皮肤细胞为模型，研究了绿茶和老鹰茶提取液的防长波紫外线作用。

一 材料和方法
1.1 绿茶和老鹰茶水提物的制备
    绿茶产自四川蒙山，老鹰茶产自四川雅安，均为当年新茶。称取绿茶和老鹰茶各5g，加入煮沸双蒸水各200ml 提取两次，每次30min，合并滤液，浓缩至50ml（浓度为0.1g/ml），滤纸过滤，使用前0.22μm除菌过滤。
1.2 UVA光源
    按照Alapetite等［1］的方法，两支6W UVA平行灯管（上海顾村光电仪器厂）光线通过365nm滤光片（上海顾村光电仪器厂）过滤，用UV-M紫外线辐照计（北京师范大学光仪器厂）测定其功率。UVA光源95%以上能量集中在365nm处。
1.3 细胞处理
    细胞培养：成纤维细胞取至正常成年人包皮环切术，由四川大学免疫教研室提供。采用DMEM培养基（GIBCO），加入10%小牛血清（HYCLONE），HEPES（HYCLONE）20mmol/L，置5%CO2孵箱中培养。
处理方法：生长良好的对数期细胞用胰蛋白酶消化后，悬浮于含20%小牛血清DMEM培养液，调整细胞浓度，按1.0×104cells/孔加入96孔培养板，培养24小时后吸出上清，0.01mol/l PBS洗涤一次，UVA照射，照射完毕，加入20%DMEM培养液继续培养。
1.4 MTT染色和乳酸脱氢酶（LDH）活性检测
    将细胞培养于96孔培养板，培养结束前吸出上清，上清进行乳酸脱氢酶活性检测，细胞加入100 5%DMEM培养基和20/孔MTT溶液（SIGMA），继续培养3-4小时。吸去上清，加入DMSO 100/孔，振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶标仪（Labsystems Dragon,Wellscan MK3）上测定光吸收（A值），测定波长为490nm。采用乳酸脱氢酶试剂盒（四川迈克），在7020Automatic Analyzer(HITACH)上进行乳酸脱氢酶活性测定。
1.5 UVA辐射剂量对细胞的影响
    细胞置冰上，在超净工作台上一定距离照射，UVA功率为0.5mW/cm2，分别照射1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h和8h，相应的剂量为1.8、 3.6、 5.4 、7.2、 9.0、 10.8、 12.6、 14.4J/ cm2 ，照射完毕加入20%DMEM200μL/孔，24h后吸出上清，细胞进行MTT染色。同时设细胞对照和空白对照。细胞对照用双层医用胶布蒙住，其余处理同处理组，每个处理6个复孔（下同）。
1.6 绿茶和老鹰茶水提取物对UVA损伤的修复作用
    细胞处理同上,细胞贴壁24h后吸出上清,PBS洗涤一次,用PBS将提取物稀释为5、２.５、１.２５mg/ml,加入细胞孔ＵＶＡ１０J//cm2照射，照射完毕，吸出上清，加入ＰＢＳ洗涤一次每孔加入200μL20%DEME，培养24h后取上清进行LDH检测。同时设细胞对照、阴性对照和空白对照。阴性对照为UVA照射，不加提取物，以同体积PBS代替（下同）。
1.7 绿茶和老鹰茶水提取物对UVA损伤的修复作用
    细胞处理同上，细胞贴壁24小时后吸出上清，PBS洗涤一次，孔加入50μL PBS,UVA１０J//cm2照射，照射完毕，吸出上清，加入用DMEM喜事的浓度分别为5、2.5、1.25 mg/ml绿茶和老鹰茶提取物，培养24小时侯取上清进行LDH检测。同时设细胞对照，阴性对照和空白对照。
1.8 修复率的计算及统计学处理
    修复率=［（LDH活性-细胞对照LDH活性）/（阴性对照LDH活性细胞对照LDH活性）］100%
统计学处理方法：两样本间比较采用T检验。

二 UVA对细胞的损伤机理
    关于紫外线对人的伤害以前集中在对UVC的研究上，对UVBUVA的研究较少。事实上，不同波长的紫外线对体外细胞损伤的机理，最近几年受到了各国科学家的重视。K等认为，短波段紫外线的能量足够高，能通过DNA的直接吸收产生 CPDS和6，4光产物，其他类型的损伤较少，UVC和UVB能产生这种直接损害；而UVA能量较弱，产生直接光损害不明显，它主要是通过产生活性氧自由基对细胞造成间接伤害。生理状态下产生的ROS很低，它可被抗氧化酶如超氧化物歧化酶，过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等清除。当UVA照射所促成的自由基生成量超过清除机制的清除极限时，发生自由基积累，而自由基在体内可引起DNA损伤，造成单双链断裂以及碱基损伤，DNA分子交联等，造成对细胞的伤害。
绿茶提取液的防UVA损伤和修复机理
    除水以外，茶是世界上消费最多的饮料。茶叶的品种很多，主要包括绿茶、红茶和乌龙茶。我国居民饮用的主要是绿茶。绿茶是新鲜的茶叶经过蒸青和晒青后制成，化学成分与新鲜茶叶基本相同。绿茶主要活性成分为茶多酚，占茶叶于重的30%，包括黄烷醇类、黄烷双醇、黄酮类和酚酸，其中黄烷醇类所占比例最大，占多酚类总量的80%。通常把黄烷醇类称为儿茶素，包括表没食子儿茶素没食子酸酯、和表儿茶素等。
    目前对茶多酚的应用研究较多，茶多酚是一种抗氧化能力很强的坦然抗氧剂。S等以兔子和鲨鱼眼球角膜为模型，研究了绿茶多酚对UVA诱发的光氧化的保护作用，研究发现ECG能有效保护眼球角膜内过氧化氢酶活性，防护UVA诱发的损伤。另外研究还发现，绿茶中的茶黄素和茶褐素可以通过抑制氧化作用和细胞色素P450的表达来减少DNA的损伤。

老鹰茶提取液的防UVA损伤和修复机理
    老鹰茶也称白茶，是我国南方民间长期饮用的植物代用茶。其以樟科植物川黔润楠为原料，采其幼嫩枝叶，经过翻炒杀青、揉搓、烤干等而制得。这是一种无毒副作用、无污染、风味较佳的纯天然野生饮品，主要分布在我国贵州、四川及重庆一带。老鹰茶主要含氨基酸、矿质元素，维生素、黄酮、多酚等物质，与绿茶相比，老老鹰茶总黄酮含量远高于绿茶，多酚类含量低于绿茶，水溶性蛋白，水浸出物量均低于绿茶，未检出咖啡因，总糖含量与绿茶接近。此外，老鹰茶皂甙含量较高。老鹰茶的应用研究较少，它的抗紫外线活性可能与他的生活性物质黄酮，多酚、皂甙类有关。
    本实验采用人皮肤成纤维细胞为模型，探讨了绿茶和老鹰茶对长波紫外线的防护作用，得到了一些初步结论。但也有很多地方需要进一步研究。如茶叶的组成成分复杂，茶叶提出物的有效成分与抗紫外线活性的关系：本实验中采用的UVA 剂量为半致死剂量，而茶叶的抗紫外线活性与紫外线剂量之间的关系也是我们要进一步探讨的内容。
    中国有广阔的茶叶资源，用茶提取物取代全部或部分化学防晒剂制备防晒霜，能降低防晒用品的刺激性，从而也拓展了茶叶的新通途。